生物实验中的对照(control)

生物实验中,对照(control)是必不可少的。怎么做对照是一个学问,当年上“生命科学研究方法”课程时,老师讲整整3个小时还意犹未尽。这里谈谈我的看法。

在我看来,对照可以分为阳性对照(positive control)和阴性对照(negative control)。

阳性对照,是一定能做出来的,如果做不出来,那说明你的实验体系有问题。在小木虫上,经常有人构建质粒做了很久一直做不出来,发帖求助。构建质粒涉及到PCR、酶切、连接、转化等多个步骤,可能出问题的点很多。你可以随便扩增一段片段,连接到T载体上面,如果能顺利构建出来,PCR、连接、转化等基本上是没有问题的。从多克隆位点处对载体进行线性化,很难判断载体是否完全切开。用试剂盒提取出来的质粒,一般不会出现超螺旋、开环、线性三种构象,而且大载体的这三种构象也不好区分。如果想验证限制性内切酶是否好用,应该从你的质粒库选一个酶切后片段很分明的质粒去做酶切。当做完足够多的阳性对照后,基本上可以排除实验体系的问题了。这时,你的实验还做不出来,可以考虑优化条件了。不建议盲目地重复或者优化失败的实验。一个优秀实验员(应该写得出一手号代码,开个玩笑),不仅拥有丰富的知识、充足的经验、娴熟的技巧,更重要的是必胜的信念。做阳性对照,能大大提升你对实验成功的信心,因为它是很容易也一定能做出来的。

阴性对照,是一定做不出来的,如果做出来了,那说明你的实验结果不可信。当你想通过实验说明某个因果关系时,有人会反驳你这个果未必是这个因引起的,可能还存在“小三”。那你这个时候,做个阴性对照,来control掉这个“小三”。

总结一下,实验结果阴性(就是没做出想要的结果啦),看阳性对照,如果阳性对照阴性,实验体系有问题;实验结果阳性(就是结果很好),看阴性对照,如果阴性对照阳性,实验结果不可信。